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            異硫氰酸胍|593-84-0|應用之提取DNA和RNA

            2015-09-11 來源:亞科官網
            摘要:本文介紹了異硫氰酸胍的一種用途,即異硫氰酸胍法同時提取血清、雙拭子中動物DNA病毒和RNA病毒核酸。該方法綜合了經典的Trizol提取法和以Trizol作為裂解液的硅膠模柱式提取法兩種方法,彌補了兩種方法的缺陷。
            關鍵詞:異硫氰酸胍法,593-84-0,提取DNA和RNA,Trizol提取法,硅膠模柱式提取法
            前言
            異硫氰酸胍,CAS號:593-84-0,分子式:C2H6N4S,分子量:118.161,白色結晶粉末,熔點115-120℃,用于變性裂解細胞;提取RNA和DNA,無RNA酶和DNA酶活性,強蛋白變性劑,是蘇州亞科化學的優勢產品。文章介紹了專利型異硫氰酸胍法提取同時提取DNA病毒和RNA病毒核酸。
            異硫氰酸胍法提取同時提取DNA病毒和RNA病毒核酸
            隨著分子生物學的快速發展,基因診斷成為檢測動物疫病最準確而有效地手段,進行基因診斷的過程中,病毒核酸的提取是進行檢測的前提條件,核酸提取的質量也影響檢測的準確性。
            當前,動物病毒核酸提取方法主要有經典Trizol提取法和以Trizol作為裂解液的硅膠模柱式提取法兩種方法。經典Trizol提取法過程繁瑣、周期長、提取效率低、技術要求高,以Trizol作為裂解液的硅膠模柱式提取法成本較高、提取RNA的質量不高、且只能提取RNA病毒。
            一種同時提取血清、雙拭子中動物DNA病毒和RNA病毒核酸的方法,包括步驟:對待提取物使用異硫氰酸胍裂解液裂解;硅膠膜吸附RNA;洗液Ⅰ除去雜蛋白;洗液Ⅱ洗去雜質;DEPC水洗脫核 酸;上述異硫氰酸胍裂解液包括3-7M異硫氰酸胍、0.6%-1.0%TriTon-100、30-50mM Tris-Cl、5-15mM DTT、60-90μg/mL蛋白酶K、10-30mM EDTA,PH在4.3-4.6。
            上述洗液Ⅰ包括5-6M鹽酸胍,53-59%無水乙醇,K70-90μg/mL蛋白酶,PH在6.4-6.6;上述洗液Ⅱ包括70-80%乙醇。
            進一步地,上述異硫氰酸胍裂解液包括5M異硫氰酸胍、0.8%TriTon-100、40mM Tris-Cl、10mM DTT、80μg/mL蛋白酶K、20mM EDTA,pH在4.5。進一步地,上述洗液Ⅰ包括5.5M鹽酸胍,56%無水乙醇,80μg/mL蛋白酶K,PH在6.5。進一步地,上述洗液Ⅱ包括75%乙醇。
            上述操作步驟包括:
            (1)取一干凈離心管,100μL樣品加入200μL的異硫氰酸胍裂解液中,振蕩混勻,放置5分鐘。
            (2)加入與異硫氰酸胍裂解液等體積的無水乙醇,即200μL,顛倒反復混勻15秒。
            (3)將過濾柱套在2mL收集管上,全部混合液移到過濾柱上,12,000rpm離心1分鐘。
            (4)棄收集管內的液體,往過濾柱加入600μL的洗液1,12000rpm離心1分鐘。
            (5)棄收集管內的液體,往過濾柱加入600μL的洗液2,12000rpm離心1分鐘,再重復一次。
            (7)棄收集管內的液體,過濾柱套在收集管上,12000rpm離心1分鐘;
            (8)換新的1.5mL離心管套上過濾柱,加20μLDEPC到過濾柱膜上,室溫放置1分鐘,12,000rpm離心1分鐘,收集濾液,保存。 
            結束語
            該發明的有益效果:同時提取動物血清樣本、雙拭子樣本中的RNA病毒和DNA病毒核酸,具有方法簡便、快速、成本低的特點。該方法為建立動物RNA病毒和DNA病毒多重PCR方法奠定核酸提取基礎。
            參考文獻
            [1]蘇州亞科科技股份有限公司產品詳細信息
            [2]趙宏波;陳幫照, 一種同時提取血清、雙拭子中動物DNA病毒和RNA病毒核酸的方法[P],CN103614371A,2014.03.05
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            本文由蘇州亞科科技股份有限公司編輯

             


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