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            異硫氰酸胍|593-84-0|裂解液使用中的問題解析

            2017-03-01 來源:亞科官網
            2017-3-1
            DNA提取
                    異硫氰酸胍是強用力的蛋白質變性劑,既能迅速溶解蛋白質,導致細胞結構破碎,核蛋白由于其二級結構的破壞消失而迅速與核酸分離,又對RNA酶有強烈的變性作用。因此,異硫氰酸胍可用于變性劑裂解細胞,使RNA與蛋白質分離,并將RNA釋放到溶液中。然而,在異硫氰酸胍溶液的配制和使用中,經常會遇到一些問題,本文將對這些問題進行一一總結。
            異硫氰酸胍溶液是否需要現用現配?
                   提取試劑以異硫氰酸胍的終濃度為4M為例:先以42mM檸檬酸鈉、0.83%N-lauryl sarcosine(十二烷基,N-甲基甘氨酸鈉)、0.2mM β-巰基乙醇制得CSB緩沖液;異硫氰酸胍25g、CSB緩沖液33mL,混合直至完全溶解,可加熱在65℃助溶,制得變性液,4℃保存備用。
                    所以,異硫氰酸胍溶液可以不必非要現用現配,而且目前市場上也有不同濃度的溶液銷售,但放置時間不易過長,否則會有沉淀析出,在使用前需要仔細檢查;另外,如果一次性配制過多,建議進行分裝。
            異硫氰酸胍溶液配制好之后是否需要滅菌?
                    異硫氰酸胍溶液并沒有必要滅菌,該溶液并不是非常穩定,而且配裂解液一般要用0.1%的DEPC水,水已經進行過滅菌。另外提取RNA的所有試劑在配制時都需要用DEPC水配制,而且試劑最好為新開啟并作為RNA專用。
                    雖然配制好的裂解液不需要滅菌,但要注意的是,實驗中所用到的塑料制品,已經標明Rnase-Free的,如果沒有開封使用過,可以直接使用,其他的都必須經過處理:在雙蒸水中加入DEPC,使其終濃度為0.1%,將塑料制品浸泡其中,通風廚過夜,之后再用鋁箔封住,高溫高壓滅菌至少30min,干燥備用。
            異硫氰酸胍的毒性如何?
                    吸入,攝入,皮膚接觸異硫氰酸胍均可造成損傷,所以操作時需穿好實驗服,戴好手套和護目鏡;其與酸接觸可釋放極高毒性氣體,對水生生物有害,可能對水體環境產生長期不良影響,因此應避免釋放至環境中。
            使用過后的廢液如何處理?
                    實驗室的污染主要有生物性污染和化學污染,按形態大致可分為廢水、廢氣和固體污染物。其中,生物污染包括生物廢棄物污染和生物細菌毒素污染,而化學污染包括有機物污染和無機物污染??傮w來說,各類廢液需進行分類,原則上原瓶回收,如需混裝,則需確定試劑混合后不產生熱量、有毒氣體、爆炸等?;厥掌可弦残枳⒚魉幤访Q、濃度,進行統一回收處理,不可隨意丟棄,造成環境污染和毒害。
                    隨著分子生物學的快速發展,基因診斷成為檢測最準確而有效地手段,進行基因診斷的過程中,病毒核酸的提取是進行檢測的前提條件,核酸提取的質量也影響檢測的準確性,而裂解液品質的好壞直接影響到核酸提取的質量,進而影響到實驗的結果。異硫氰酸胍溶液作為最常用的細胞裂解液,只有處理好每一個細節,才能夠在安全實驗的基礎上獲得最好的實驗結果。
            相關鏈接:異硫氰酸胍

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